Caracterizacion molecular de tres especies del genero Rhodophiala

Abstract

Rhodophiala, género perteneciente a la familia Amaryllidaceae, presente en Chile, posee características morfológicas con potencial ornamental y ha sido escasamente caracterizado molecularmente. Como la clasificación de este género se basa en reconocimientos morfológicos, necesita una clasificación objetiva, siendo la comparación molecular del ADN a través de secuencias repetitivas (ISSR) una herramienta biotecnológica que cumple con esta condición. El objetivo es comparar tres especies del género Rhodophiala, mediante la técnica de marcadores moleculares basados en ADN (ISSR) y estableciendo un método de extracción de ADN para el género. Se recolectaron bulbos de 3 especies de Rhodophiala. Éstos fueron plantados en macetas con un sustrato de tierra de hojas y turba, crecidos en un invernadero con cubierta de polietileno. La extracción del ADN se realizó desde hojas, usando el método CTAB, el cual fue modificado para lograr un mejor rendimiento de extracción. La integridad del ADN fue analizada mediante gel de agarosa y cuantificada por espectrofotometría. Se generó el patrón genético por PCR, mediante la utilización de 54 partidores ISSR, de los cuales doce permitieron obtener productos de amplificación y solo diez mostraron polimorfismo entre los individuos analizados. Los productos de amplificación fueron separados por electroforesis en gel de agarosa, visualizados en un transiluminador mediante tinción con bromuro de etidio y analizados en una tabla de matriz de datos de doble estado (presencia o ausencia de bandas). Los coeficientes de similitud fueron analizados mediante varianza molecular y las distancias genéticas se utilizaron para realizar el análisis de los componentes principales (PCA) mediante el programa NTSYSpc. Éste análisis, permite visualizar cada especie como un grupo, donde R. splendens y R. ananuca mostraron la mayor similitud. Por su parte R. ananuca se agrupó alejada de las anteriores, con un índice de disimilitud de aproximadamente 14%. Esta representación, fue analizada mediante la razón de los coeficientes, cuyo valor de separación entre especies es superior a 90%, indicando una alta confiabilidad del cálculo realizado. La utilización de los partidores ISSR, permiten diferenciar las especies en estudio y son una herramienta complementaria en la identificación botánica.